В мире активно проводится разведение и выращивание пресноводных и морских рыб, а также креветок. В процессе культивирования большинства морских рыб и различных видов креветок − так же как и некоторых пресноводных разновидностей − живые корма являются основным компонентом на личиночной стадии. На этом этапе коловратка является наиболее часто используемым живым кормом в тот период, когда малек переходит от эндогенного (сохранение внутренней энергии) к экзогенному (внешнему) типу питания. По завершении стадии кормления коловраткой, до перехода мальков к общему рациону, аквариумисты пользуются артемей в качестве пищевого продукта.

Как источник пищи для мальков, артемии должны быть высокого качества, как можно более питательные, и должны сохранять эти свойства до тех пор, пока не будут поглощены мальками. Существует 4 определенные стадии культивирования артемий. Вот эти стадии: (1) декапсуляция (2) инкубация и выклев (3) обогащение и (4) хранение. Артемии также являются возможными переносчиками инфекций в систему развития личинок, поэтому все процедуры по разведению и уходу должны проводиться с соблюдением санитарных норм и их протоколированием, это же касается и процедуры выклева яиц. Эта статья дает описания условий, логического обоснования, детализированного продуктивного протокола для всех стадий выведения высококачественных артемий.

Декапсуляция артемии

Логическое обоснование

Артемии представляют собой один из немногих видов живых кормов, которые могут быть выведены в значительном количестве и по размеру подходят малькам на переходе от питания коловратками и после отнятия от кормления самкой. В течение некоторого отрезка своего жизненного цикла, артемии находятся в состоянии диапаузы и способны выдерживать экстремальные условия окружающей среды в течение длительного периода. Яйца легко перевозить, поэтому именно в этой форме артемии обычно закупаются для инкубаторных станций. Тем не менее, яйца артемии могут создавать некоторые проблемы для мальков, потому что:

1. Оболочка яйца неудобоварима и может вызвать у малька кишечную непроходимость при поглощении яйца.

2. Яйца являются возможными переносчиками инфекции в культивируемую систему.

3. Артемии потребляют большие объемы запасов эндогенной энергии, когда вылупляются из оболочки яйца.

4. Яйца необходимо физически отделять от живой артемии после выклева.

Декапсуляция яиц артемий – это процесс, посредством которого внешняя оболочка или хорион удаляется с яйца химическим путем. Этот процесс является решением проблем, обозначенных выше, и уже стал стандартной практикой у рыбоводов, желающих вывести высококачественные артемии.

Необходимые условия декапсуляции яиц артемии

Яйца артемии: 1 килограмм (кг)

Сосуд для декапсуляции: 20 литров (л)

Гипохлорит натрия (NaOCl; 5.5%): 8 л при 2-10 градусов по Цельсию (°C)

Гидроксид натрия (NaOH; 40%): 4 л при температуре 2 – 10°C

Тиосульфат натрия (Na₂S₂O₃ ): 100 г

Сачок для декапсулированных яиц: 100 микрометров (мкм)

Процедура декапсуляции артемии

Гидратация

Первый шаг в процедуре декапсуляции артемии – это гидратация яиц. Гидратация яиц позволяет отделить науплии от хориона, облегчая процесс декапсуляции. Для этого артемии помещают в пресную либо соленую воду при комнатной температуре примерно на 1 час, при этом концентрация яиц артемии должна составлять 1 г на 15 миллилитров (мл) воды. В течение этой процедуры важно поддерживать смешение яиц посредством аэрации. После часа гидратации, яйца необходимо просушить с помощью сачка в 100 мкм и поместить обратно в пустой сосуд для декапсуляции.

Декапсуляция

Для декапсуляции налейте охлажденный раствор гидроксида натрия в сосуд для декапсуляции, в котором уже находятся гидратизированные яйца, снова проверяя, чтобы аэрация в сосуде была достаточной, для того чтобы яйца не оседали. Затем следует добавить охлажденный гипохлорит натрия, чтобы начался процесс декапсуляции. Так как во время декапсуляции проходит экзотермическая химическая реакция, рекомендуется начинать с химическими растворами, охлажденными до температуры от 2 до 10°C. Такие начальные температуры не позволят температуре химического раствора превысить 35°C, при которой яйца повреждаются. Во время декапсуляции хорион удаляется химическим способом, в результате чего яйца меняют свой цвет от серого к оранжевому, и затем к ярко-оранжевому. Этот ярко-оранжевый цвет обозначает, что процесс декапсуляции завершен. (Плавучесть яиц также может служить индикатором окончания процесса: в случае, если примерно 90% яиц идут на дно). Процесс должен занимать от одной до трех минут, но может отличаться от этих параметров в зависимости от варьирования температур. Если передержать яйца в декапсуляционном растворе, они быстро повредятся, что негативно скажется на уровне выклева яиц. Настоятельно рекомендуется тщательно контролировать процесс, нормализуя его для ваших конкретных условий.

Сбор

После определения факта окончания декапсуляции яиц, добавьте 75г тиосульфата натрия в сосуд для декапсуляции, чтобы нейтрализовать остатки хлора, затем немедленно просушите яйца через сачок в 100 мкм. Во время сбора декапсулированных яиц (Рисунок 2), промойте их обильным количеством воды (пресной или соленой), в то же время обеспечивая достаточную аэрацию с помощью аквариумного распылителя воздуха, чтобы поддерживать яйца на плаву. Когда все декапсулированные яйца собраны, необходимо добавить оставшийся тиосульфат натрия в сачок для сбора. Продолжайте промывать яйца в сачке до тех пор, пока вытекающая вода не станет прозрачной и полностью не исчезнут остатки хлора.

Рисунок 2: Сбор декапсулированных артемий – сачок для сбора и ведро для воды после промывания

Хранение

Декапсулированные яйца могут быть просушены от излишней воды и затем храниться в герметичном контейнере в холодильной камере до двух недель. Для более длительных сроков хранения (два месяца и более) яйца должны быть обезвожены путем помещения в вентилируемый соленый раствор (330 г хлорида натрия [NaCl] на литр воды) с концентрацией 1 г яиц на 20 мл раствора на 24 часа. Они могут быть промыты и помещены в подходящий контейнер, наполненный свежим раствором и затем храниться в ходильной камере.

Выклев яиц артемии

Логическое обоснование

Процесс выклева науплий артемии, будучи довольно простым, требует должного исполнения, т.к. это жизненно важно для повышения качества. Стандартизация протоколов необходима, т.к. любое отклонение в процессе оказывает сильное влияние на коэффициент выклева, питательность и размер выведенных науплий. Яйца артемии дорогостоящи, одни из самых затратных для инкубаторной станции. Поэтому необходимо прилагать все усилия к тому, чтобы повысить уровень вылклева и качество науплий. Более того, т.к. велик риск заражения патогенными инфекциями, необходимо принимать меры по биобезопасности, чтобы снизить этот риск.

Необходимые условия выклева яиц артемии

Температура: 26-30°C

pH: 8.0-9.0

Растворенный кислород: > 4 мг/л

Уровень освещенности: ~2000 люкс

Соленость: 25-30 частей на тысячу

Инкубационная плотность: ≤ 2 г сухих яиц/л (до 5 г/л с дополнительным O2)

Гидрокарбонат натрия: (NaHCO₃): 0.5 г/л

Пеногаситель (на силиконовой основе): 1 мл/100 л

Процедура выклева артемии

Наполните чистый инкубационный сосуд с коническим дном теплой профильтрованной морской водой. Если теплой морской воды нет под рукой, предварительно дайте воде нагреться до 26°C — 30°C в инкубационном резервуаре с помощью подводных нагревателей. Добавьте 0.5 г гидрокарбоната натрия на литр воды, чтобы уровень pH поддерживался между 8.0 и 9.0 в течение всей процедуры. Антимикробные продукты, такие как INVE’s Hatch Controller (INVE, Солт-Лейк-Сити, штат Юта) могут быть использованы, чтобы снизить риск заражения в инкубационном резервуаре. Надлежащая плотность скопления недекапсулированных яиц составляет около 2 г на литр. В случае с декапсулированными яйцами, надо брать из расчета 5 г на литр. Эти показатели могут быть удвоены при добавлении чистого кислорода, что необходимо для поддержания уровня растворенного кислорода более, чем 4 г на литр. Попытки увеличить плотность скопления яиц может привести к физическому повреждению науплий и снижению качества. Важно поддерживать необходимый уровень аэрации на дне резервуара, чтобы яйца не оседали. (Рисунок 3). При выведении больших объемов яиц, предпочтительно использовать пищевой пеногаситель, чтобы свести к минимуму чрезмерное пенообразование в культуре.

Время выклева будет варьироваться в зависимости от плотности и возраста яиц, температуры, солености воды и т.д. Таким образом, важно свести к минимуму временные различия выклева для большей согласованности.

Как правило, артемии требуется для выклева от 18 до 24 часов инкубации. Тем не менее, декапсулированные яйца могут быть готовы вылупиться уже через 16 часов инкубации. Если вы будете сразу кормить рыб науплиями, регулирование времени выклева очень важно. Если науплии слишком долго остаются в резервуаре для выведения, они вырастут слишком большими, и их питательные свойства уменьшатся. Определение окончания вылупления яиц должно производиться путем наблюдений под микроскопом за относительным числом выведенных науплий, готовящихся к выклеву и невылупившихся яиц.

Рисунок 3. Резервуар для выклева артемий. Обратите внимание на шланги подачи чистого кислорода и на провода от подводных нагревателей на передней стенке резервуара.

Сбор артемии

Процедура сбора варьируется в зависимости от того, какие яйца были использованы при выведении: декапсулированные или нет. При сборе после предварительно декапсулированных яиц, просто процедите воду через сачок в 125 мкм. В сачок надо поместить аквариумный распылитель воздуха для поддержания уровня кислорода, чтобы науплии не оседали. После того, как все науплии собраны, промойте и в сачке чистой водой в течение не менее пяти минут. После промывания, постарайтесь отделить инкубационные мембраны (которые остались невредимы после процесса декапсуляции) от науплий. Для этого поместите артемии в кулер, резервуар для обогащения, или другую чистую емкость при плотности менее 5 млн. на литр. При помощи пористого диффузора кислорода (Point Four Systems, Британская Колумбия, Канада) необходимо ввести кислород в кулер. Маленькие пузырьки кислорода приклеятся к мембранам и после нескольких минут они всплывут, и их можно будет снять с поверхности. После удаления мембран, науплии можно использовать, как корм длямальков, либо науплии могут быть перемещены для последующего обогащения или для хранения в холоде. Если вы работали с недекапсулированными яйцами, выключите аэрацию на 10-15 минут. Это позволит науплиям, как и невылупившимся яйцам осесть на дно резервуара, в то время как вылупившиеся яйца всплывут на поверхность. Выключение вентиляции более, чем на 15 минут приведет к тому, что артемии начнут задыхаться. Артемии движутся на свет, поэтому накрытие резервуара и/или перемещение источника света на дно резервуара также поможет в разделении. После того, как все осядет, откройте нижний сток и удалите невылупившиеся яйца, которые будут выходить первыми. Либо, в резервуар может быть помещена водонапорная трубка до того, как все урегулируется, чтобы между дном и поверхностью был 1 дюйм, благодаря чему собранный на дне материал не будет перемешан. Тогда только что вылупившиеся науплии необходимо собрать сачком и промыть в течение, по меньшей мере, пяти минут. Если науплии расположились правильно, то понадобится осушить только 75% толщи воды. В процессе сбора проверяйте относительное соотношение науплий и яиц путем помещения образцов в стеклянную мензурку. Это поможет определить момент, когда процесс сбора будет завершен или же тот факт, когда требуется еще время для правильного расположения артемий. Теперь науплии можно скормить вашим рыбам, переместить для дальнейшего обогащения либо хранения в холоде.

Подсчет артемий

Подсчет собранных артемий необходим для определения точных дозировок для кормления и обогащения, и для контроля качества выклева. Коэффициенты выклева будут варьироваться в зависимости от плотности и возраста яиц, но, вообще говоря, опытные пользователи должны получить коэффициент выклева, при культивировании яиц науплий из Большого Соленого Озера, — 200,000 или более науплий на грамм недекапсулированных яиц. Хотя существует большое множество методов подсчета вылупившихся артемий (два из них представлены ниже), важно выбрать наиболее подходящий вам по условиям и следовать ему для разработки стандартизированных протоколов подсчета для вашего удобства, чтобы свести к минимуму отклонения от указаний выбранного вами метода.

Метод 1: После того, как вы собрали и промыли артемии, поместите их в чистый, хорошо вентилируемый контейнер с плотностью не более 5 млн. на литр. Чтобы посчитать артемии, необходимо взять небольшую подвыборку из хорошо перемешанных образцов в контейнере для хранения и десятикратно разбавить. Поместите 1 мл разбавленного образца на предметное стекло для подсчтеа и добавьте 1 или 2 капли формалина либо раствора Люголя, чтобы иммобилизовать артемии. Подсчитайте под небольшим уведичением и запишите число неповрежденных, здоровых на вид науплий. Подсчеты необходимо сделать 2 или 3 раза, чтобы получить среднее число. Умножьте среднее число на 10 (множитель разбавленности), чтобы определить число артемий на миллилитр в контейнере для хранения.

Рисунок 4. Только что вылупившиеся артемии на предметном стекле для подсчетов: круглый объект – яйцо, из которого только что вылупилась артемия.

Метод 2: Сконцентрируйте промытые артемии в 10 литрах соленой воды с усиленной аэрацией. Возьмите 10 мл артемий и добавьте в 990 мл соленой воды. Наберите пипеткой 1 мл образца и посчитайте количество живых особей в пипетке. Верните образец обратно в контейнер, снова наберите 1мл образца в пипетку, посчитайте, повторите процесс от пяти до десяти раз, чтобы вычислить среднее число. Среднее число, в данном методе, умноженное на миллион (множитель разбавленности), и будет равняться итоговому числу артемий.

Обогащение артемий

Логическое обоснование

Прежде чем быть скормленными малькам, науплии артемий обычно подвергаются специальной диете для повышения питательности и увеличения размеров. Хотя только что вылупившиеся артемии богаты протеином и могут служить переходным кормом от коловраток до обогащенных артемий для многих видов рыб, в них совершенно отсутствуют полезные жирные кислоты, необходимые для должного роста и развития большинства мальков. С целью следования процедуре витаминизации артемий, будет использован протокол употребления продукции компании INVE − DC DHA SELCO.

Необходимые условия для обогащения артемий

Температура: 25°C pH: 8.0-8.5

Растворенный кислород: > 4 мг/л

Соленость: 20-30 частей на тысячу

Плотность: ≤ 300 науплий/мл

Дозировка препарата DC DHA: 0.6 г/л

Продолжительность обогащения: 20-24 часа

Процедура обогащения артемий

Существует множество доступных препаратов для обогащения артемий. Т.к. эти продукты имеют различный состав, питательную ценность и протоколы обогащения, то решать, какой из них наиболее подходит для условий выращивания и определенных видов рыб надлежит менеджерам по выклеву яиц. Когда препарат для обогащения уже выбран, важно вести стандартизированный проток и неуклонно ему следовать. Небольшие изменения в температуре или времени обогащения, например, могут сильно влиять на размер и питательные качества получаемого продукта. Получение витаминизированных артемий требует запаса времени в два дня: первый день необходим для выклева артемий (см. протокол выклева артемий), второй день посвящен обогащению артемий.

Чтобы облегчить этот процесс, необходим второй резервуар, специально для витаминизации. Как и в случае с выклевом, идеальным будет резервуар с коническим дном, что поможет обеспечить тщательное смешивание и полное высыхание во время сбора. Перед процедурой резервуар для обогащения необходимо наполнить подходящим количеством воды, а параметры качества воды (температура, соленость и pH) должны быть отрегулированы таким образом, чтобы соответствовать условиями, описанным выше. Важно начинать процесс обогащения с использованием здоровых, высоко качественных науплий. Науплии, которые еще до обогащения были вялыми или поврежденными, в результате станут субоптимальным питательным веществом. Необходимо аккуратно удалять пустые яйца (недекапсулированные яйца) и мемраны после выклева (от декапсулированных яиц) – так, как описано в разделе о выклеве яиц артемии. Науплии артемии также должны быть хорошо промыты перед помещением в резервуар для обогащения. Это особенно важно при использовании в процессе выклева таких добавок, как INVE’s Hatch Controller и пеногаситель, так как ингредиенты этих продуктов могут помешать процессу обогащения.

Во время процесса обогащения необходимо установить энергичную аэрацию через дно резервуара, а также необходимо тщательно отслеживать уровень растворенного кислорода в течение всего процесса. (Рисунок 5). Во время этой стадии, скорее всего, понадобится использование дополнительного кислорода, чтобы поддерживать уровень кислорода более 4х мг на литр. Следует поддерживать температуру на 25°C с помощью подводных нагревателей либо горстки льда, в зависимости от окружающих условий.

Рисунок 5. Многочисленные конусы для витаминизации артемий. Обратите внимание на энергичную аэрацию.
Сбор

В конце процесса обогащения вся масса воды должна быть процежена сквозь сачок в 125 мкм со значительной аэрацией, чтобы обогащенные артемии не оседали. Уровни кислорода в сачке необходимо тщательно отслеживать. Артемии необходимо тщательно промыть в течение 5 минут или до тех пор, пока вытекающая вода не станет прозрачной. После этого необходимо переместить артемии в контейнер, наполненный определенным количеством воды, с энергичной аэрацией, и посчитать, как уже было описано выше. Если вы не собираетесь сразу же кормить артемиями мальков, то необходимо сразу де поместить их в холодное место для хранения, как описано ниже.

 

Хранение в холодном месте

Артемии, которые не будут сразу же скормлены малькам или обогащены, должны храниться в условиях холода. Хранение артемий в холоде очень сильно снижает их метаболизм, что прямо влияет на снижение роста и метаболизма протеиновых и липидных запасов. Артемии необходимо переместить в кулер или подходящий контейнер и хранить при 2 — 10°C, с умеренной аэрацией, чтобы предотвратить оседание. (Рисунок 6). В таких условиях концентрация артемий должна составлять не более 5,000 на миллилитр и храниться они должны не более 24х часов.

Рисунок 6. Артемии, хранимые в холоде: бутылки со льдом для температурного контроля и трубка с воздухом для аэрации.

——

оригинал: pubs.ext.vt.edu/600/600-106/600-106.html

---

Статья подверглась 1 проверке читателем (07.01.2014)

---