Кровь тиляпии и других рыб, как и в случае других позвоночных животных, является жидкой субстанцией, включающей клеточные элементы (эритроциты и лейкоциты), взвешенные в плазме.

Одной из основных функций крови является дыхательная функция, перенос кислорода от жабр в ткани и углекислого газа из тканей в жабры. Кроме того, кровь обеспечивает резервуар для абсорбции и транспортировки питательных веществ, витаминов и гормонов, а также удаление продуктов обмена и защиту тела от определенных инфекционных агентов.

Анализ образцов крови

С точки зрения специалиста по здоровью рыб, кровь имеет преимущество как объект диагностики. Для анализа можно брать её небольшие объемы, без умерщвления животного. Часто гематологические изменения связаны с расстройствами и специфическими заболеваниями, включая инфекционный процесс, неблагоприятные условия окружающей среды и недостаток питания.

Параметры крови, которые чаще всего оценивают во время рутинной гематологической процедуры, включают концентрацию гемоглобина, гематокритное число, количество эритроцитов, аспекты морфологии и распределение форменных элементов крови (лейкоцитарная формула).

Приготовление мазка крови

Удобно готовить два тонких мазка от каждой рыбы, один из которых окрашивать по методике Лейшмана или Гимза, а второй оставляют на случай, если понадобится окрашивать по Граму и определять присутствие бактерий в крови, связанной с бактериемии.

В таких случаях, результаты окрашивания по Граму могут указать, например, на бактериальнаую геморрагическую септицемию на основе обнаружения грамотрицательных палочек или бацилл (окрашиваются красным), либо возможный хронический стрептококкоз в случае присутствия грамположительных кокков (окрашиваются синим-фиолетовым). Эти микроорганизмы присутствуют в свободном виде или будучи захваченными макрофагами в периферической крови.

Анемия

Ferguson, 1989, детально описал различные типы анемии, которые встречаются у рыб. Он впервые установил, что эту патологию можно классифицировать на основе числа, размера эритроцитов и концентрации гемоглобина. Анемии подразделяются на зависимые (регенеративные) и независимые. Затем их можно разделить на геморрагическую (потеря крови) и гемолитическую (снижается продукция клеток крови).

Возрастание образования полихроматоцитов, например, свидетельствует о зависимой (регенеративной) анемии. В случаях гемолитической анемии, в селезенке начнет накапливаться гемосидерин, и в кровеносном русле возрастет число полихроматоцитов, если, конечно, гемопоэтическая активность, сама по себе, не остановится в процессе разрушения гемопоэтической ткани.

В культуре тиляпии распространены состояния анемии, связанные с дефицитом питательных веществ. Ярким примером является гепатический липидоз (жирная печень), при котором отмечаются четкие гематологические изменения. Если гранулированный корм содержит высокий уровень масел и полиненасыщенных жиров, они быстро протухают или окисляются, возрастает уровень перекисей и других потенциально токсичных веществ. Это, в свою очередь, вызывает некроз почечной гемопоэтической ткани, что, само по себе, негативно сказывается на гемопоэтической активности.

В результате, большие количества эритроцитов, полихроматоцитов и даже эритробластов попадают в периферическую кровь, порождая специфическую анемию, с преобладанием незрелых форм эритроцитов. Этот процесс может сопровождаться снижением концентрации гемоглобина и числа гематокрита.

Окисление жиров в рационе предотвращают внесением в корм витамина E (токоферола), который работает как антиоксидант. Однако в процессе окисления количество токоферола снижается и, как следствие, у рыб отмечается дефицит витамина E. Обычно это приводит к ломкости эритроцитов и формированию сморщенных клеток. Процесс усугубляется снижением числа циркулирующих полихроматоцитов, заметной тромбоцитопенией, которая ухудшает нормальную коагуляцию крови.

При любых подозрениях на присутствие гепатического липидоза и/или недостаток витамина E необходимо провести гематологические исследования.

Хотя детальная информация о природе и типе возникшей анемии не всегда доступна, известно, что недостаток в рационе витамина K3 (менадиона) имеет тенденцию снижать число гематокрита и удлинять время свертывания крови. Несколько докладов авитаминоза у тиляпии и гибридов упоминали «низкий гематокрит» (витамин B1, тиамин), «анемию» (витамин C или аскорбиновая кислота), «низкий гемоглобин» (витамин D, холекальциферол), без подробного описания состояния.

Анемия, обусловленная недостатком тиамина, однако, известна как микроцитарная анемия, при которой в крови отмечаются многочисленные делящиеся полихроматоциты. Железодефицитная анемия также характеризуется своей гипохроматической и микроцитарной природой.

Требования витамина B12 (цианокобаламин) и B9 (фолиевая кислота) в рационе тиляпии необходимо аккуратно оценивать. С точки зрения питательной ценности они взаимно дополняют друг друга, поэтому недостаток одного из них вызывает проблемы. У тиляпии с недостатком витамина B12 развивается характерная гипохромная анемия, часто связанная с присутствием эритроцитов с признаками разделения ядра, сегментацией и/или кариорексиса (распада ядра). Анемия от недостатка фолиевой кислоты характеризуется присутствием нормохромных макроцитов, вместе с делящимися эритроцитами, образующими форму песочных часов.

Интересно отметить, что в естественных условиях Нильская тиляпия (Oreochromis niloticus) имеет кишечную микрофлору, способную синтезировать витамин B12 в достаточном для удовлетворения потребностей количестве (Lovell и Limsuwan, 1982; Sugita et al., 1990, 1991). Авторы столкнулись с очень интересной взаимосвязью между уровнем витамина B12 и числом живых бактерий «Bacterioides типа A» в кишечнике. Lovell и Limsuwan также отметили, что Нильской тиляпии, которая принимает достаточное количество холина (витамин B4) с кормом, не нужно вносить дополнительный витамин B12.

Очень вероятно, однако, что интенсификация культуры потребует дополнительного внесения витамина B12 в рацион. Кишечная микрофлора не может произвести этот витамин в достаточном количестве в условиях интенсивной культуры.

Минимальный уровень включения витаминов в рацион тиляпии, предложенный Национальным исследовательским советом США (NRC, 1993) представлен в таблице 1.

Таблица 1.

Витамин	Вид	Минимальный уровень, мг/кл корма
Витамин E (токоферол)	Oreochromis aureus O. niloticus	25 50-100
Витамин B2 (рибофлавин)	O. aureus	6
Витамин C (аскорбиновая кислота)	O. aureus	50
Витамин B12 (цианокобаламин)	O. niloticus	нет специфических требований

Инфекции и гематологическая картина

Ranzani-Paiva с коллегами, 2004, провел интересное исследование с заражением Нильской тиляпии (O.niloticus) бактерией Mycobacterium marinum (микобактериоз). Они изучали изменение гематологических показателей. Инфекция приводила к выраженным изменениям гемопоэтических тканей селезенки и почек, появлению отдельных гипохромной и микроцитарной анемий.

На первый день после заражения появлялся транзиторный лейкоцитоз, связанный с нейтрофилией и умеренным лимфоцитозом.

На третий день, отмечалась нейтропения и яркий лимфоцитоз. Ряд циркулирующих моноцитов, спустя три недели, увеличиваются в размере. Вследствие прогрессирующей инфекции эти клетки сильно вакуолизированы. Изменения в дифференциальном числе лейкоцитов указывают на начальный острый воспалительный процесс, с последующим переходом в хроническую инфекцию.

Заключение

Хотя прогресс непрерывно совершается, очевидно, текущий уровень знаний о рационе тиляпий (в частности, витаминах, минералах, следовых элементов), до сих пор, позади области выращивания Лососевых рыб. Поэтому, рыбоводы должны быть уверены, что производители кормов поставляют им продукт с адекватным уровнем витаминов и других незаменимых веществ, отсутствием окисленных жиров, афлатоксинов и т.д..

Ферме и производственному центру, где выращивают тиляпию, важно определить собственные «нормальные гематологические параметры» для видов и/или гибридов тиляпии, которые сформировались в текущих условиях. Hrubec с коллегами, 2000, опубликовал некоторые референсные значения показателей крови гибридов тиляпии (O.niloticus x O.mossambicus x O.aureus), имеющих среднюю массу 240 граммов, среднюю длину 220 мм, в условиях интенсивного культивирования, когда рыбу кормили коммерческими кормами. Значения представлены в таблице 2.

Таблица 2.

Параметр	Значение
Гемоглобин, г/100мл	8.2 (7.0 – 9.8)
Гематокрит, %	33 (27 – 37)
Число эритроцитов, х106/мм3	2.31 (1.91 – 2.83)
Число белых кровяных телец, х106/мм3	7.56 (2.15 – 15.47)
Средний объём эритроцитов mcv, мкм3	135.7 (115 – 183)
Среднее содержание гемоглобина в эритроците mch, пикограмм	34.9 (28.3 – 42.3)
Средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах mchc, %	25.7 (22 – 29)

Гематологические исследования и правильная интерпретация результатов приобретает особую важность в выращивании тиляпии. Рекомендуется внедрять этот инструмент в стандартную практику диагностики инфекционных и паразитарных заболеваний тиляпии.

——
По информации Gina Conroy, David A Conroy. Haematology as a tool to assess farmed tilapia health. Aquaculture Health International. 2007

Conroy DA and Conroy G 2007. Basic atlas of normal and abnormal blood cells in farmed tilapias/Atlas básico de las células sanguíneas normales y anormales en tilapias cultivadas. Bilingual (English-Spanish) CD-ROM. Patterson Peddie Consulting Ltd, Carrickfergus, UK.

Ferguson HW 1989. Systemic pathology of fish: a text and atlas of comparative tissue responses in diseases of teleosts. Iowa State University Press, Ames, US.A. 1st edition. pp263

Hrubec TC, Cardinale JL and Smith SA 2000. Haematology and plasma chemistry reference intervals for cultured tilapia Oreochromis hybrid. Vet. Clin. Pathol. 29. pp7-12.

Lovell RT and Limsuwan T 1982. Intestinal synthesis and dietary nonessentiality of vitamin B12 for Tilapia nilotica. Trans. Am. Fish. Soc. 111. pp485-490

NRC 1993. Nutrient requirements of fish. National Academy Press, Washington DC, USA. pp114

Ranzani-Paiva NJT, Ishikawa CM, Cocuzza das Eiras A and Risaffi da Silveira V 2004. Effects of an experimental challenge with Mycobacterium marinum on the blood parameters of Nile tilapia Oreochromis niloticus (Linnaeus 1757). Braz. Arch. Biol. Technol. 47 pp1-11

Sugita H, Miyajima C and Deguchi Y 1990. The vitamin B12- producing ability of intestinal bacteria isolated from tilapia and channel catfish. Nippon Suisan Gakkaishi 56. pp701

Sugita H, Miyajima C and Deguchi Y 1991. The vitamin B12- producing ability of the intestinal microflora of freshwater fish. Aquaculture 92. pp267-276