Получение мальков гибридов сома

Выдавливание икры из самок сома
Выдавливание икры из самок сома

Производство гибридов канального сома (Ictalurus punctatus) и синего сома (Ictalurus furcatus) ведется с начала 1966 года. Разработка методов производства гибридов имеет экономическое значение и продолжается по сей день. По большей части, полученные гибриды нескольких производственных линий обладают лучшими, чем у родителей, показателями выживаемости, роста, сопротивляемости заболеваниям. Методика создания гибрида при скрещивании самки канального сома и самца синего сома схожа с той, которая проводится при обратном скрещивании самца канального сома и самки синего сома, однако проходит легче и лучше.

Основным ограничением для коммерческого производства гибридов выступает недостаток надежных и дешевых методов для создания большого количества мальков в условиях рыбоводческой фермы.

Традиционное разведение в прудах, которое является эффективным для выращивания мальков сома, оказывается неэффективным для массового производства их гибридов потому, что существуют репродуктивные барьеры (поведенческие, физиологические и другие), препятствующие скрещиванию синего и канального сомов. Хотя имеются сведения о случаях нереста и появлении гибридного потомства, они редки и непригодны для коммерческих целей. Тем не менее, последние технологии значительно увеличили цикличность проведения нереста. В настоящее время, создание гибридов базируется на использовании гормонов индуцирования овуляции (окончательная зрелость и высвобождение икры) у самок, ручном отделении икринок и их оплодотворения спермой синего сома.

Вызываемый гормонами нерест широко используется в технике производства мальков различных видов и включает различные вещества (общий гипофизарный экстракт карпа — CCP, аналог гонадотропин-высвобождающего гормона или люлиберина — LHRHa, человеческий плацентарный гормон роста). Данные вещества инициируют цепь реакций, которая приводит к овуляции и высвобождению икринок сома. Широко используемыми и признанными как наиболее эффективные для индуцирования овуляции являются CCP и LHRHa.

Выращивание гибридов в прудах

Гибриды обладают преимуществами в отношении сопротивляемости заболеваниям, росте и простоте выращивания. Могут возникнуть сложности отлова при использовании традиционных сетей с ячейками 3 см, так как голова гибридов меньше, чем у канального сома. Распутывание и освобождение жабр сома часто приводит к сопутствующим Columnaris инфекциям.
Кроме того, при недостатке аэрации гибриды концентрируются у поверхности воды в отличие от канального сома. Поэтому для ускоренного развития и обеспечения выживаемости необходимо усиленная аэрация.

Разведение мальков гибридов сома

Гормональное вызывание нереста сомов обычно укладывается в три дня. CCP и LHRHa требуют двойного введения. Первая инъекция делается в первый день, вторая на второй и на третий день рыбки помещаются на нерест. Расписание для инъекций CCP и LHRHa является общим. Днем самке делают первую инъекцию. Можно утром ввести вещества самке, а затем перенести её в аквариум, либо произвести инъекцирование днем. Перед операцией необходимо взвесить рыбку и подсчитать дозу препарата, исходя из массы. На следующий день в 9-12 часов производят второе введение, обычно через 20-28 часов у самки наступает овуляция, хотя это время значительно варьирует. Самок помещают в аквариум с температурой 24-27 °C. На третий день утром собирают и готовят семенники самцов синего сома, проверяют овуляцию самок, начинают отделять и оплодотворять икру спермой.

День 1. Отбирают и переносят самок из аквариума. Взвешивают и в первый раз вводят вещества. На 1 или 2 день отлавливают синих самцов и помещают их в аквариум.
День 2. Взвешивают и дают самкам вторую инъекцию.
День 3. Убивают синих самцов, собирают семенники и готовят сперму. Проверяют готовность самок к овуляции, выдавливают и оплодотворяют икру.

Производители Отбор/Уход
Уход за гормонально индуцируемыми производителями схож с таковым для обычных сомов, однако имеются некоторые различия. Первая заключается в снижении количества самцов, содержащихся с самками, что вызвано искусственным оплодотворением икры. Однако полное исключение самцов из пруда нежелательно, потому что они оказывают благоприятное воздействие на половое развитие самок.

Самки канального сома, используемые для производства гибридов, должны быть трехлетнего возраста или старше. Молодые, мелкие особи размножаются позднее в году и это разобщает их со взрослыми самками, которые раньше приступают к нересту. Предпочтения по возрасту размеру самок, используемых для гибридизации, разнятся. Сомы массой 2-3,2 кг могут быть идеальными. Рыбки меньшего размера метают меньше икринок, в то время как выдавливание большого количества икры у крупных самок может утомить их.

Вероятно, наилучшим способом определения готовности самок к гибридизации является помещение нескольких особей на обычный нерест. Начало нереста является индикатором готовности.

Прекращение кормления за 3 дня до операции также является индикатором готовности. У созревших особей живот будет припухлым от развитых яйцевых камер. По сытым рыбкам сложно определить зрелые яичники. Если рыбки были покормлены по ошибке, ждите несколько дней, а затем заново осматривайте.

Для отбора сетью вылавливают рыбу, берут её за хвост головой книзу, и держат так, чтобы полностью видеть опухший живот. Другим показателем готовности к нересту является красное вздутое анальное отверстие. Тем не менее, при большом количестве самок быстрее определять особей по округлому животу. Особи с плоским брюшком или слегка вздутым негодны и не используются. В дальнейшем, пруд может быть осмотрен заново, и самки, которые вначале не были готовы, могут созреть. Если для гибридизации не обнаружены достаточно качественные самки, можно сократить число используемых особей, либо осмотреть другие пруды. Это поможет сэкономить на гормонах.

Важно минимизировать стресс во время проведения процедур, избегать недостатка кислорода, и если проверка проходит в жарких условиях, необходимо выбирать утренние часы, когда вода ещё холодная. Нельзя оставлять большое количество самок продолжительное время в садке. Следует быстро и аккуратно брать рыбок и помещать их в аквариум с постоянной аэрацией и, если возможно, аэрацией чистым кислородом.

Необходимо избегать грубого обращения с самкой, это может стать причиной повреждение яичников. Сгустки крови в яичниках затягивают овуляцию, а выдавливание икринок будет затруднено.

Самки, которые ранее подвергались гормональной стимуляции, снижают свою продуктивность. Таким образом, лучших результатов можно добиться при использовании новых самок. Иногда производителям необходимо произвести нерест перед или после пика половой активности. В данном случае, стоит помнить, что для наилучшего результата самка должна быть готова к икрометанию. Если инъекция произведены после пика активности, необходимо проверять знаки готовности и зрелости.

Успешное проведение гибридизации зависит от условий, созданных в пруду. Так, теплая вода ускоряет созревание производителей, что делает возможным производить нерест раньше назначенного природой срока. По наблюдениям Университета штата Луизианы сомам необходимо для созревания 100 градус-дней при температуре 21 °C, что эквивалентно 25 дням при 25 °C. Разводчики полосатого окуня часто продлевают сезон нереста, помещая белого американского окуня в холодную воду, что обеспечивает точные сроки. Тем не менее, методы ускорения или отсрочки нереста при помощи манипуляций с внешними условиями вводят дополнительные расходы.

Самцы синего сома достигают половой зрелости в возрасте 4-5 лет. Их пол может быть определен также как и у канального сома, самцы имеют выраженный половой бугорок с круглым отверстием, у самок бугорок утопленный и отверстие овальное.

Слева самка, справа самец канального сома.
Слева самка, справа самец канального сома.

Половое созревание семенников у синего сома происходит практически одновременно с созреванием самок канального сома. Однако, от индивида к индивиду, созревание семенников разнится, и сложно определить готовность самца к нересту по его внешним признакам или размеру. Современные методы не позволяют определить готовность самцов в размножению, поэтому производится вскрытие особи с последующим удалением семенников. Основное правило в отборе производителей следующее: один самец синего сома способен оплодотворить до 8 самок канального сома среднего размера. Таким образом, используя 4-5 самцов, можно оплодотворить 32-40 самок. Так, Masser and Dunham (1998, SRAC # 190, Production of Hybrid Catfish) руководствуются меньшим соотношением 1 самец на 3-5 самок или, переводя на количество спермы, 0,5 г спермы используется для оплодотворения 100 мл икры. Конечно, количество синих самцов зависит от размеров и развития семенников и качества спермы, а также от количества икринок. В данном случае, была бы очень кстати разработка быстрого анализа степени развития семенников ещё живой особи.

Доза гормона и его введение
Двумя наиболее используемыми вещества, индуцирующими овуляцию (окончательная зрелость и выделение икры), являются общий экстракт гипофиза карпа (CCP) и аналог гонадотропин-высвобождающего гормона или люлиберина (LHRHa). Оба компонента признаны очень эффективными в области выращивания гибридов. LHRHa является очищенным и долговечным синтетическим продуктом. Ранний сезон нереста требует повышенной дозы данного вещества, и затраты на него возрастают. Опыт использования двух препаратов показывает, что время от инъекции до овуляции больше при введении LHRHa, чем CCP. Это дает преимущества и недостатки. Возрастает время, за которое можно проверить готовность каждой самки к овуляции.

Использование CCP
CCP сухой экстракт гипофиза, полученный из карпа. Данная структура залегает в основании головного мозга. Продукция и запас гипофизарного гонадотропного гормона играет ключевую роль в появлении овуляции. CCP эффективен для вызова овуляции у различных видов рыб. Так как гормон собирается у рыбок в неочищенной форме, вероятно, его эффективность от вида к виду будет варьировать. В начале сезона нереста для вызова овуляции CCP более эффективен по сравнению с LHRH. Кроме того, после введения CCP овуляция у самок наступает более синхронно.

Первичная эффективная доза CCP для сомов составляет 2 мг/кг массы тела, а следующая за ней окончательная доза – 8 мг/кг массы тела. Время введения разнится от особи к особи, но обычно первая производится в один день, спустя 12-18 часов вводится вторая, а через 20-30 часов у рыбок начинается овуляция. Время между второй инъекцией и овуляцией имеет тенденцию удлиняться в начале сезона нереста и укорачиваться в конце, а также зависит от температуры воды.
CCP обычно продается в виде сухого порошка в 1 г пузырьках, и может длительное время (месяцы – годы) храниться в темном месте. Одного грамма экстракта хватит, чтобы провести инъекцию 100 кг самок. Перед введением, CCP растворяют с физиологическим солевым раствором, используют фосфатный буфер (PBS).

Фосфатный солевой буфер включает (на 1 литр): NaCl – 8 г; KCl – 0,2 г; Na2HPO4 – 1,44 г; KH2PO4 – 0,24 г; растворением HCl доводят pH до 7,4; автоклавируют для стерилизации.

Необходимо сделать такую концентрацию, чтобы 0,1 мл раствора приходился на 0,5 кг рыбы (2,5 кг самка получает 0,5 мл раствора, а 5 кг – 1 мл). Для этого, вносят 1 г CCP в пробирку, содержащую 27,5 мл фосфатного буфера = 36,4 мг CCP/мл, встряхивают и помещают отстаиваться в холодильник на 1-2 часа. В течение двух часов на дно осядут некоторые частицы, которые могут забить иглу шприца при введении раствора (используются 18-20 калибр иглы) и вызовут различного рода инфекции. После осаждения шприцом забирают 5,5 мл раствора и вносят его в 16,5 мл свежего фосфатного буфера, чтобы получить 22 мл раствора концентрацией 9,1 мг CCP/1 мл. Маркируют эту пробирку как инъекцию для первого введения. Встряхивают первоначальную пробирку (36,5 мг/мл)и дают взвеси осесть. Затем шприцом переносят полученный раствор в новую пробирку, мелкие частицы при этом не страшны, но необходимо избегать слишком большого их количества. Имеется 22 мл раствора, из которого можно вытянуть лишь 19-20 мл. После того как были вытянуты 19-20 мл чистого раствора, в оставшийся осадок вливают свежий фосфатный буфер, встряхивают пробирку и затем изымают недостающие 3 мл. Полученные 22 мл раствора имеют концентрацию 36,4 мг CCP/мл, его маркируют как инъекцию для второго введения. В первый день самки получают инъекцию 0,1 мл/0,5 кг массы тела (= 0,91 мг CCP/0,5 кг), а на второй день 0,1 мл/0,5 кг массы тела (= 3,64 мг CCP/0,5 кг). Маточные растворы могут долгое время храниться в замороженном виде. Стоит отметить, что заморозка не влияет на характеристики инъекции, но необходимо избегать многочисленных циклов заморозки-оттаивания.

Наиболее распространенным местом введения является область позади анального плавника. Наркотизированная (100 млн-1 трикаина метансульфонат (MS-222) или 40 млн-1 AQUI-S (коммерческий анестетик, в состав которого входит 0,54 мг/мл изоэвгенола)) самка меньше подвержена стрессу во время укола, что исключит выбивание шприца из рук. Рыба берется за хвост головой книзу и быстро инъецируется позади анального плавника. Для введения CCP используются 3-5 мл шприцы с иглой калибра 18-20. 3-5 мл шприцы позволяют аккуратно вводить раствор особям массой 15-25 кг. Инъецированные сомы переводятся в отдельный аквариум.

Использование LHRHa
Инъекция производится по аналогии с введением экстракта гипофиза. Доза, вводимая самкам, составляет 100 мкг/кг, и она делится на слабую первую и вторую более крупную.

Инъецируется менее 1 мл, согласно этому готовятся растворы. Используя шприц, вносят 5 мл PBS в пузырек до полного растворении LHRHa. После растворения берут 5 мм, содержащих 5 мг вещества, и вносят в чистую пробирку с 8,8 мл PBS, получается 13,8 мл раствор = 364 мкг/мл (вторая инъекция). Шприцом изымают 2,8 мл из полученного раствора и вносят в другую пробирку с 8,2 мл PBS, доведя объем до 11 мл, при концентрации 91 мкг/мл (первая инъекция). Получается 11 мл инъекций на первый день и столько же на второй. В первый день вводят 0,2 мл/кг (= 18 мкг/кг). 2,5 кг рыбы получают 0,5 мл, а 5 кг – 1 мл. Аналогично вводят вторую дозу.

Сбор и приготовление семенников
Неправильное обращение или сбор семенников/спермы может привести к невозможности оплодотворения. Большинство людей убивают синего сома ударом по голове, что исключает использование седативных средств. Кроме того, использование анестетиков может негативно сказаться на качестве спермы. После умерщвления рыбу вытирают полотенцем. Важно, чтобы пресная вода не попала на семенники, потому что сперматозоиды активизируются при воздействии свежей воды. После активации, сперматозоиды сохраняют жизнеспособность в течение 1 минуты. Более того, нельзя допускать активации спермы, вплоть до её смешивания с икрой. Перед оплодотворением семенники/сперма помещается в специальный фосфатный солевой буфер Hanks (Hanks Buffered Salt Solution (HBSS)), раствор, воспроизводящий ионный состав жидкости внутри рыбы и, таким образом, обеспечивают её жизнеспособность в неактивированном виде. Если сперма активировалась, то любые дальнейшие манипуляции бессмысленны.

Состав HBSS (на 1 литр): NaCl – 7,94 г; D-глюкоза – 1,0 г; KCl – 0,4 г; NaHCO3 – 0,35 г; KH2PO4 – 0,06 г; Na2HPO4 – 0,05 г. Для приготовления спермы используют дистиллированную, деионизированную воду. Можно применять размороженную воду.

Слева показано вскрытие самца синего сома и извлечение семенников (справа).
Слева показано вскрытие самца синего сома и извлечение семенников (справа).

Кладут самца на спину, делают продольный разрез по срединной линии и обнажают брюшную полость. Семенники являются парным органом, идущим от анального отверстия до переднего края полости тела, и лежащим вдоль верхней стенки полости. Хорошо развитые семенники сома представляют собой белые волнистые образования, а созревшие будут фиолетово-коричневатые небольшого размера. Острым ножом или скальпелем удаляют семенники. Рыба будет кровоточить во время операции, поэтому её обмакивают фильтровальной бумагой. Хотя кровь и не активирует сперму, потому что имеет схожий ионный состав, нужно минимизировать скапливание крови в семенниках. Затем семенники помещают в контейнер, содержащий HBSS. Взбалтыванием контейнера, промывают их. После ополаскивания помещают семенники в контейнер с 250 мл HBSS. Затем их переносят на металлическое сито (используется для приготовления пищи) и продавливают сперму в раствор. Просеивание продолжают до тех пор, пока семенники не станут плоскими, и большая часть спермы не окажется в растворе. Последний приобретает слегка розоватый оттенок. После всех манипуляций полученный раствор переливают в чистую, лишенную воды, герметичную емкость, которую хранят во льду или холодильнике. Емкости объемом 1,5 литра годятся для хранения спермы от 4-5 самцов.

Промывание и просеивание семенников (сверху), сортировка спермы по пробиркам (снизу).
Промывание и просеивание семенников (сверху), сортировка спермы по пробиркам (снизу).

Следует четко представлять, какое количество спермы необходимо для оплодотворения за одно скрещивание и для всей икры. Как правило, 75-90% инъецированных самок овулируют. Таким образом, инъецируя 45-50 особей, должно получиться 35-45 скрещиваний. Рассчитывая, что 1 литра спермы хватит на оплодотворение икры от 40 самок, на одно оплодотворение используют 1/40 от литра. Перед оплодотворением раствор со спермой разливается по пробиркам.

Отличной идеей является проверка качества спермы под микроскопом. Простейший метод позволяет определить подвижность сперматозоидов перед их использованием. Он не требует дорогого микроскопа. Под большим увеличением сперма выглядит как маленькие овальные пятна, от которых отходят цепочечные хвостики. В данном случае сперма не должна двигаться, и можно видеть лишь движение жидкости под покровным стеклом. Если аккуратно добавить воды, то сперматозоиды активизируются и начнут быстро перемещаться в разных направлениях. Это означает, что сперма хорошего качества и была правильно приготовлена. Не все сперматозоиды подвижны, и при наличии хотя бы 30-50% движущихся единиц можно говорить о том, что сперма качественная. Наблюдения нужно производить быстро, потому что через минуту движение прекращается. Параллельно проверяется качество приготовленного раствора HBSS. Если подвижность после добавления воды не наблюдается, это значит, что сперматозоиды ранее уже двигались в растворе, и HBSS сделан неправильно.

Время овуляции
Правильно определение времени овуляции является ключевым моментов для успешного разведения гибридов. При овуляции икра выходит и стенки яичников и, если она не будет удалена, качество икринок начнет ухудшаться. Кроме того, ключом к успешному искусственному оплодотворению сомов (и других рыбок) является точное определение времени овуляции самок. Если отделение икры начнется до момента созревания, икра не будет выдавливаться, её качество и количество резко сократится, если же отделение производится слишком поздно, икринки будут хорошими, однако снизится степень их оплодотворения. Ко всему, у самок сомов, в отличие от других рыб, овуляция не синхронизирована, то есть за один нерест выходят не вся икра. В данном случае, только личный опыт может предсказать готовность самок.

Простейшим методом определения овуляции является выделение икры при легком надавливании на брюшко. Другой метод предполагает отслеживание овуляции некоторых самок, находящихся в пруду. На дно или вниз по течению устанавливается 120-200 см длины трубы ПВХ диаметром 10 см. Изредка их можно вытаскивать для осмотра при помощи веревки. Если утром ожидается нерест, следует за 2-3 часа до важного события посмотреть трубу и продолжать это делать каждые 30 минут. При овуляции самки начинают выделять небольшое количество икринок в воду, часть которых скапливается в трубах. Для проверки самок, аккуратно вылавливают их сетью, обхватывают позади хвоста и кладут верх брюшком. Нежно надавливают на брюшко, одновременно большим пальцем с одной стороны и остальными пальцами с другой. Повторяют надавливание 3-4 раза, и если икра появилась, значит самка готова. Сила, с которой давят на брюшко, зависит от рыбы, от скорости выхода икры и от опыта разводчика. Нежелательно воздействовать на рыбу седативными средствами, так как это затягивает проверку. Самки, не готовые к нересту, отправляются в отдельный аквариум и вновь проверяются через 2 часа.

Отделение и оплодотворение
Рыба, готовая к нересту, подвергается наркозу. Она помещается в аэрируемую емкость с 100 млн-1 MS-222 (0,1 г/л) или 40 млн-1 AQUI-S (0,04 мл/л). Когда рыба наркотизирована, промывают её от транквилизатора пресной водой. Обхватывают рыбу за основание хвоста, а голову заживают локтем так, чтобы брюшко смотрело вниз. Голова должна быть слегка приподнята, чтобы сила тяжести помогала выходить икре. Выдавливают икру до опустошения, показателем чего служит появление красных кровяных сгустков. Если икринки выходят хорошо, но имеют вид слипшейся массы, то это говорит о незавершенности овуляции. Такую особь помещают обратно в аквариум и отделяют икру позднее, хотя результат все равно будет невелик. Если икра выходит свободно, но икринки слипшиеся и некоторые имеют белую окраску, то это говорит о икринки выходят рано и начали деградировать.

Определение начала овуляции у самок канального сома и отделение икры.
Определение начала овуляции у самок канального сома и отделение икры.

Икра может собираться в любые пластиковые емкости, однако нужно помнить, что без использования лубрикантов, оплодотворенная икра начинает липнуть к стенкам. Могут использоваться различные типы смазочных веществ (жир, добавляемый в тесто для рассыпчатости; смазка клапанов; масло для жарки).

После добавления лубрикантов в емкость, наливают 1,8-2,5 см HBSS и затем начинают выдавливать икру. После отделения масса икринок зависит от её количества. Если получилось больше 350 г, её делят на несколько емкостей. Можно, конечно, оставить все в одном объеме, однако пласт получится слишком толстым, поток воды не будет достаточной мере омывать икринки, и выведется малый процент. Если в икре присутствуют крупные сгустки белой икры или крови, их удаляют, потому что они являются субстратом для размножения бактерий и грибов. Для ополаскивания икры используют большое количество HBSS. Для приготовления спермы применяют HBSS на основе дистиллированной воды, тогда как для ополаскивания икры подойдет любая нехлорированная вода. Промывка значительно повысит выход мальков.

Полоскание икры в растворе HBSS и готовая в инкубации икра.
Полоскание икры в растворе HBSS и готовая в инкубации икра.

Подготовленная для оплодотворения сперма должна быть разделена по пробиркам, находящимся во льду или холодильнике. Добавляют одну порцию спермы в емкость с икрой и быстро её размешивают, затем вливают 2,5 см инкубационной воды и вновь перемешивают. После 1-2 минут наполняют емкость оставшейся водой, икринки становятся твердыми и слипаются друг с другом. На этой стадии, в емкость льют инкубационную воду так, чтобы обеспечивался ток и замена жидкости, но не слишком сильно, чтобы икринки не вылились. После этого остается только позаботиться о самках и поместить икру на инкубацию.

Уход за икрой сомов
Одним из важнейших аспектов выращивания гибридов является обработка икры во избежание развития бактерий и грибов. Как правило, разводчики ведут специальные протоколы, которые очень важны при активной обработке икры. Основной причиной, по которой протоколирование моментов наиболее эффективного ухода за икрой представляется лучшей техникой, являются сложности выращивания икры гибридов в промышленных масштабах, с уровнем рождаемости, схожим с выращиванием икры канального сома в пруду. Неоплодотворенные икринки являются прекрасным субстратом для развития бактерий и грибов, которые затем переходят на оплодотворенные и, тем самым, снижают рождаемость мальков.

Изредка можно получить оплодотворяемость около 100% и это будет очень хорошим исходом, однако также может выйти и 10-20%. Агрессивная обработка икринок способна помочь в случае, когда наблюдается 50-80% оплодотворяемость. Без обработки с оплодотворяемостью 50% рождаемость значительно снизится. Даже в случае ухода за икрой рождаемость может быть ниже степени оплодотворяемости.

Улучшение показателей выклева требует большого практического опыта и постоянного внимания. Оптимальный уровень развития достигается в хороших условиях среды, с минимальным вмешательством в работу системы и при агрессивной обработке икринок. В отличие от прудового разведения канального сома можно контролировать время появления и размеры выводка. Важно, чтобы толщина кладки не была слишком большой, потому что обработка не будет такой эффективной. Также важно, чтобы начало обработки приходилось на 8-12 часов после оплодотворения и были исключены любые химические воздействия в диапазоне 40-46 часов. Исследования показали, что данный временной промежуток является критической точкой в развитии эмбрионов.

Факторы, приводящие к смерти икры и заболеваниям
Искусственное оплодотворение часто сопровождается большим количеством неоплодотворенных или мертвых икринок. Перенаселение, грубое обращение, плохие условия среды, например, слишком высокая температура и грязная вода, во время инкубации также приводят к гибели кладки. Мертвые и неоплодотворенные икринки становятся отправной точкой в развитии патогенных агентов. Они присутствуют даже в очень хороших санитарных условиях. Однажды начавшись, инфекция быстро выходит из под контроля. Поэтому первостепенной задачей является профилактика.

Мертвые икринки
Необходимо проводить постоянный мониторинг на присутствие мертвой икры. Живые икринки выглядят прозрачными и имеют желтый или оранжево-красный оттенок. На 1-2 день инкубации сложно определить мертвые икринки, но на 3 день они становятся непрозрачными и бледными, и требуют удаления. Некоторые из них могут увеличиваться в размере.

Перенаселение
Многие факторы, влияющие на максимальную степень загруженности, могут поддерживаться. В одном контейнере (ширина — 20 см; длина – 41 см; глубина – 10 см) обычно инкубируются две большие кладки (1кг каждая) и три маленькие (0,5 кг каждая). Кладки, которые перекрываются, становятся объектом плохой водной циркуляции, что снижает выживаемость и приводит к быстрому переносу инфекции.

Температура
Температура является важным фактором, воздействующим на развитие мальков, степень вынашивания и восприимчивость к инфекциям. Для инкубации рекомендуется оптимальный температурный диапазон – 26-28 °C. При других значениях степень выживаемости резко падает.

Зависимость рождаемости от температуры воды в инкубаторе
Зависимость уровня рождаемости от температуры воды в инкубаторе

Время развития эмбриона также зависит от температуры. Канальный сом обычно размножается весной, когда температура составляет 21-29 °C. При этом время инкубации колеблется от 5 до 10 суток.

Зависимость времени выклева от температуры воды в инкубаторе
Зависимость времени выклева от температуры воды в инкубаторе

Жесткость воды
Низкий уровень кальция в воде повышает смертность. Инкубация в воде с кальциевой жесткостью — 10 млн-1 в течение первых 24 часов после оплодотворения снижает рождаемость на 70%. Низкая кальциевая жесткость на более поздних стадиях развития приводит к снижению рождаемости на 25%. Поэтому важно поддерживать адекватную жесткость в диапазоне – 20 млн-1., особенно, в первые 24 часа инкубации.

Патогенные организмы
Первостепенными угрозами для инкубируемой кладки являются бактерии и грибки. Вспышки инфекции, в основном, наблюдаются при температуре около 28 °C и высокой плотности кладки. Бактериальная гниль икры проявляется в виде белого налета. Данные обрастания затрагивают мертвые и поврежденные икринки и часто наблюдаются на нижней стороне и в центре кладки. Молочный налет всегда сопровождает инкубацию, поэтому необходимо удалять пропавшие икринки.
Напротив, грибки развиваются при более низких температурах (26 °C и ниже) и быстро охватывают неоплодотворенные и погибшие икринки. Грибковые инфекции легко определяются по белому или коричневому матовому налету с многочисленными отростками. Если вовремя не удалить погибшую икру, грибки перейдут на здоровую.

Хотя ручное удаление зараженных икринок очень трудоемкий процесс, он крайне необходим для успешного разведения мальков. В случае с грибками эффективным оказывается химический контроль инфекции. В практике коммерческого разведения гибридов регулярно применяются дезинфицирующие вещества.

Химическая дезинфекция
В стратегии химической обработки следует принимать во внимание несколько факторов, которые определяют эффективность дезинфекции. К ним относятся биологические, физические и факторы окружающей среды.

Биологические факторы
Первичным биологическим фактором является срок развития кладки. Для определения эффектов дезинфекции на различных стадиях развития икринок проведено большое количество исследований. Оболочка икринок является надежной защитой для личинок. Когда используются адекватная концентрация, длительность и частота обработки, развитие мальков проходит нормально. По этой причине обработка должна производиться вплоть до момента появления черных пигментных пятен без их увеличения. Однако вышедшие из икры мальки крайне восприимчивы к дезинфицирующим веществам.

Наилучшие результаты по выведению гибридов были получены при обработке кладки формалином три раза в день. Стоит отметить, что дезинфекция не должна производиться в промежутке 40-46 часов после оплодотворения, потому что на данном этапе икра очень восприимчива. Зараженную кладку можно долго и часто обрабатывать в отдельной емкости.

Факторы окружающей среды
Температура и качество воды не только влияют на развитие кладки, но сказывается на эффективности дезинфекции. Токсичность некоторых химических веществ прямо пропорциональна температуре. С другой стороны, некоторые химические вещества лучше работают при более высокой температуре.

На эффективность химической обработки также влияют органические вещества в водоеме. В частности, они снижают эффективность формалина и перекиси водорода. Более того, органика является субстратом для патогенных агентов. Следует избегать высоких концентраций органики в инкубаторе.

Физические факторы
Скорость циркуляции и объем воды являются немаловажными факторами, воздействующими на качество химической обработки. Для расчета концентрации вещества должен быть известен объем емкости. Если икринки обрабатываются промешиванием в инкубационном лотке, то время полного круговорота воды должно учитываться при расчете продолжительности дезинфекции, как часть общего времени нахождения в растворе.

Проточная система представляет дополнительный риск, потому что миллионы икринок могут быть потеряны вследствие оттока воды. В качестве альтернативы проводится обработка с повышением уровня химического вещества в лотке при непрерывном потоке воды. Время, необходимое для полной смены воды, говорит о том, стоит ли увеличивать или снижать концентрацию вещества.

Большинство рекомендаций, касающихся дезинфекции икринок канального сома, говорят о 15 минутной обработке. При проточной обработке, усиленный поток воды должен компенсироваться увеличением концентрации вещества. Медленный поток, напротив, обеспечивает длительный контакт икринок с веществом, поэтому концентрация должна быть снижена.
Существует множество мнений о том, как нужно проводить обработку. Слишком короткая дезинфекция недостаточна для уничтожения патогенных организмов, а слишком длительная оказывает токсический эффект на эмбрион. В обоих случаях продуктивность будет ничтожно малой. Хороший управляющий руководствуется рекомендациями в качестве отправной точки, и согласно им осуществляет обработку.

Дезинфицирующие вещества
Формалин
Формалин является сельскохозяйственным наркотиком для борьбы с грибками икры всех видов рыб. Для 15 минутной обработки кладки используется максимально допустимая концентрация 2000 млн-1. В обычных условиях инкубации со средним уровнем смены воды каждые 40-60 минут, 2000 млн-1 могут быть токсичными для икринок канального сома.

При обработке кладки в ванной пользуются концентрацией 100 млн-1 формалина в течение 15 минут. Отток воды на это время перекрывают, но оставляют перемешивание, либо аэрацию. Когда 15 минут проходит, включают протоку и полностью меняют воду в инкубаторе. При проточной обработке успешными оказываются концентрации 100-400 млн-1 при температуре 24-30 °C. Дезинфекция более эффективна при двукратной обработке в день.

Перекись водорода
При использовании 100%-ого раствора перекиси водорода, его концентрацию доводят до 250-500 млн-1. Так как перекись водорода очень едкое вещество, его продают в концентрации – 3, 35, 50%. Наиболее используемым является концентрация – 35%.

Эффективность данного вещества зависит от температуры, и при её повышении токсичность перекиси возрастает. При температуре инкубации 26 °C эффективной оказывается 15 минутная обработка икры 250 млн-1 перекиси (715 млн-1 для 35%-го раствора). Стоит отметить, что повышение концентрации вдвое при заданной температуре значительно повышает токсичность. В более холодной воде может использовать более концентрированный раствор.

Водный поток (л/мин)

Миллилитры раствора

Формалин (37% р-р)Перекись водорода (35% р-р)
4,51040
93075
13,550110
1870150
22,590190
27110225

Пвп (поливинилпирролидон)
Для поливинилпирролидона рекомендуется 10 минутная обработка при концентрации вещества 100 млн-1. Суточная дезинфекция Пвп против грибковых инфекций оказывается не такой эффективной как формалина. Однако поливинилпирролидон является прекрасным профилактическим дезинфицирующим средством при переводе икринок из пруда в инкубатор. 10 минутная обработка 100 млн-1 раствора предшествует введению новых кладок в общий инкубатор, и значительно снижает перенос патогенов из одной емкости в другую. Использование поливинилпирролидона совместно с другими веществами повышает продуктивность на 10%.

Сульфат меди
15 минутная обработка икры 2,5-10 млн-1 раствором сульфата меди снижает заболеваемость и повышает выход мальков. Высокие концентрации оказываются токсичными и снижают продуктивность. Перед внесением в инкубатор, сульфат меди растворяют 20 литрах инкубационной воды и затем вносят. Нельзя использовать сульфат меди в алюминиевых инкубаторах, потому что он реагирует с алюминием.

Основные рекомендации
Икринки гибридов требует особого внимания к проведению дезинфекции. Многие факторы приводят к ухудшению выклева личинок, и знание оптимальных условий инкубации и обращения с икрой, а также постоянная практика являются залогом успешного разведения. Можно выделить несколько рекомендаций:

1. Избегать лишних манипуляций с икрой
2. Проводить дезинфекцию кладки поливинилпирролидоном перед её переносом в инкубатор
3. Поддерживать температуру 26-28 °C
4. Избегать переполнения инкубатора икрой
5. Поддерживать адекватную жесткость воды для высокой выживаемости
6. Активно обрабатывать икринки дезинфицирующими веществами для предотвращения вспышек инфекции
Время обработки
1. Начало дезинфекции: 8-12 часов после оплодотворения
2. Ничем не обрабатывать икру в промежутке 40-46 часов после оплодотворения
3. Обрабатывать три раза в день:
Ранняя обработка (6-7 утра)
Дневная
Вечерняя дезинфекция (6-7 вечера)
4. Прекратить обработку, когда икринки начали вылупляться. Ополаскивать икру, которая на несколько часов опоздала от ожидаемого времени вылупления.
Режим дезинфекции
1. Статическая обработка: 15 минутная ванна
А. Тройная обработка 100 млн-1 формалина (37%)
Б. Тройная обработка 100 млн-1 поливинилпирролидона (1%)
В. Тройная обработка 2,5 млн-1 сульфата меди
2. Проточная обработка; в 450 литрах с водным потоком – 15 л/мин.
А. Тройная обработка 50 мл формалина (37%)
Б. Тройная обработка 50 мл поливинилпирролидона (1%)
В. Двойная обработка 50 мл поливинилпирролидона (1%) и одна обработка 10 г порошка сульфата меди (предварительно растворяют в 20 литрах)
——
Источник и авторы оригинала статьи:
Producing Hybrid Catfish Fry: Workshop Manual // May 25, 2005
Dr. Brian Bosworth, Research Physiologist, USDA – ARS Catfish Genetics Research Unit
Dr. Brian Small, Research Physiologist, USDA – ARS Catfish Genetics Research Unit
Dr. James Steeby, Assistant Extension Professor, National Warmwater Aquaculture Center
Dr. Jimmy Avery, Extension Professor, National Warmwater Aquaculture Center
www.aces.edu/dept/fisheries/education/documents/CatfishHybridManual05.pdf

Раздел: Пресноводная аквакультура
Метки: , , ,
Похожие статьи:

Реакция постоянных читателей:

Заметил ошибку, тык*:

 Orphus

Комментарии Вконтакте:

Добавить комментарий

Войти с помощью: 

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *