Статья представляет собой перевод работы, посвященной исследованию клеток крови, морфологии и гематологических параметров сиамских бойцовых рыбок. Авторы исследования использовали образцы крови из хвостовой вены здоровых самцов (n=40) и самок (n=36). Гематологические показатели определялись с помощью стандартных методов. Морфологические особенности клеток крови описывались при рассмотрении под световым микроскопом. С помощью микрометра окуляра под увеличением в 1000 раз производилось измерение клеток крови на различных стадиях развития. Определялись эритроциты, тромбоциты и четыре типа лейкоцитов: лимфоциты, моноциты, нейтрофилы и эозинофилы. Средний размер эритроцитов и их ядра составил 97,33 и 16,28 мкм², соответственно. Результаты показывают положительную корреляцию между размером эритроцита и ядра. Обнаружена детерминированные полом различия в общем числе белых кровяных телец, лимфоцитов и нейтрофилов. Статистический анализ показал, что другие гематологические параметры и морфологии кровяных телец у самцов и самок не отличаются.

Введение
Гематологические параметры, используемые в ветеринарии и клинической медицине, являются индикаторами здоровья организма. Профиль биохимии крови и гематологии часто используются для оценки физиологического статуса позвоночных животных, рыб, рептилий и птиц. Оценка гемограммы включает подсчет общего числа эритроцитов, белых кровяных телец, определение гематокрита, концентрации гемоглобина, индекса созревания красной крови, подсчет числа различных типов лейкоцитов и оценка окрашенного образца периферической крови.

Сиамская бойцовая рыбка относится к лабиринтовым рыбам (Belontiidae). B.splenders с латинского означает бриллиантовый боец. Это точно характеризует вид, потому что самцы ярко окрашены и проявляют небывалую агрессию друг к другу. Естественный ареал обитания рыбок представлен мелководными пресными прудами с грязным дном и наводненными рисовыми полями. Благодаря лабиринтовому органу, рыбки могут дышать кислородом из атмосферы. Эта особенность позволяет выживать в бедных кислородом водоемах.

Материалы и методы
В центре по разведению рыб в Горгане, Иран, было измерено и взвешено 76 особей (40 самцов, 1,52±0,33 г, 3,82±0,43 см в длину; 36 самок, 1,69±0,48 г, 3,63±1,17 см в длину). В течение 1 недели рыбки содержались в 0,5 литровых стеклянных емкостях при температуре 28,5±1,3°C; pH 7.2, 13-часовм днем и 11-часовой ночью. Каждый день вода полностью менялась на свежую. Образцы крови брались с помощью прокола хвостовой вены анестезированных рыбок (MS-222 – 200мг/л).

Гематокрит определялся после переноса крови в микрокапилляр и центрифугирования в течение 5 минут со скоростью 4000g (расчет %/общий объем). Общее число эритроцитов (х 106/мм³), лейкоцитов (х 103/мм³) и тромбоцитов (х 103/мм³) определялось с помощью новой счетной камеры Neubauer после разбавления крови физиологического раствора Daice. Концентрация гемоглобина определялась согласно процедуре цианметгемоглобин (г/деца-литр). Гематологические индексы рассчитывались согласно Seiverd (1964). Средний объем эритроцита (MCV) выражался в фемтолитрах (10−15 л), среднее содержание гемоглобина (MCH) выражалось в пиколитрах (10-6 л), средняя концентрация гемоглобина — в г/деца-литр.

Мазки крови готовились немедленно, высушивались на воздухе, в течение 5 минут фиксировались в 95% метаноле и окрашивались раствором Гимза. Для каждой особи готовилось 1-2 мазка, которые рассматривались под микроскопом. Окрашивание по Гимза использовалось для измерения и оценки клеток крови. Размеры клеток определялись с помощью микрометра окуляра. Их идентификация проводилась на основе морфологии и ультраструктуры, как при исследовании лейкоцитов (Rowley 1990; V´azquez and Guerrero 2007). Эритроциты рыб имеют эллиптическую форму и, таким образом, длину (EL) и ширину (EW), которые измерялись. Также измерялись длина (NL) и ширина (NW) ядра. В каждом случае размеры определялись на сухих мазках с помощью окулярного микрометра Olympus при увеличении в 1000 раз.

Результаты
Гематология
Полученные данные и сравнения гематологических показателей у самцов и самок бойцовых рыбок представлены в таблице 1. Результаты демонстрируют, что число белых кровяных телец и лимфоцитов у самок значительно больше чем у самцов, а нейтрофилов значительно меньше. Другие гематологические параметры значимо не отличались.

Таблица 1. Гематологические показатели самцов и самок петушков. RBC — красные кровяные тельца (эритроциты); PCV — гематокрит; Hb — гемоглобин; MCV — средний объем эритроцита; MCH — среднее объемное содержание гемоглобина; MCHC — средняя концентрация гемоглобина. WBC — белые кровяные тельца (лейкоциты).
Hb и PCV в крови рыб снижается после вылова и транспортировки (Hattingh and Van Pletzen 1974). Особи содержались в условиях лаборатории и перед операцией наркотизировались раствором MS222.

Размер клеток крови и морфология
Размеры клеток крови и, в частности, эритроцитов самцов и самок представлены в таблице 2. Зрелые эритроциты преобладали к образцах, их размер и число значимо не отличалось между полами.

Таблица 2. Размеры клеток крови в микрометрах самцов и самок петушков. EL — длина эритроцита; EW — ширина эритроцита; NL — длина ядра; NW — ширина ядра; ES — размер эритроцита; NS — размер ядра; Тромбоцит L — длина тромбоцита; Тромбоцит W — ширина тромбоцита.

Зрелые эритроциты петушков имели овальную форму, ядро, розовую цитоплазму и центральную выпуклость, соответствующую расположению ядра. Ядро содержало хроматин и окрашивалось в темно-фиолетовую окраску.

В мазке тромбоциты часто скучивались вместе. Ядро тромбоцита округлое или овальное и темное. Цитоплазма сине-фиолетовая и располагается вокруг ядра. У петушка обнаружено четыре типа лейкоцитов: нейтрофилы, эозинофилы, лимфоциты и моноциты. Отдельная статистика по лейкоцитам представлена в таблице 2. Лимфоциты имели компактное, крупное, темное, расположенное в центре ядро. Светло-синяя тонкая цитоплазма покрывала узкую область вокруг ядра. Большинство моноцитов имело почковидную форму ядра, хроматин которого окрашивался менее интенсивно, чем у лимфоцитов. Их цитоплазма была сине-серая и занимала большую площадь. Нейтрофилы легко определялись по присутствию многочисленных, расположенных диффузно розово-красных цитоплазматических гранул. Ядро было круглое, овальное или, в большинстве случаев, двудольное, расположенное ближе к периферии. Эозинофилы представляли собой крупные, круглые, часто с неровными краями клетки. Они имели круглое или иногда двудольное ядро, расположенное не по центру. Цитоплазма эозинофилов наполнена ацидофильными гранулами, которые иногда скрывали ядро.

Обсуждение
Данные, касающиеся гематологии петушков скудны. Даже о морфологии и типе клеток периферической крови до настоящего времени ничего не было известно. Основой для настоящей работы послужили результаты исследований других видов рыб. Согласно Wintrobe (1933) размер эритроцитов отражает положение вида на эволюционной лестнице: низшие позвоночные (циклостомы, эласмобранхии, хвостатые земноводные) имеют крупные эритроциты, тогда как у высших (млекопитающие) – клетки мелкие и не имеют ядра. В крови большинства видов рыб эритроциты являются преобладающим типом клеток. Одной из наиболее важных функций эритроцитов выступает перенос кислорода и углекислого газа. При этом важно соотношение размера к площади поверхности клетки. Таким образом, мелкие эритроциты имеют более высокую емкость для переноса газов. Таблица 3 демонстрирует размеры эритроцитов различных видов костных рыб. Зрелые эритроциты Betta splenders имеют размеры и ультраструктурные особенности, аналогичные зрелым эритроцитам других видов рыб.

Таблица 3. Размеры эритроцитов у различных видов костных. EL — длина эритроцита; EW — ширина эритроцита; ES — размер эритроцита; NL — длина ядра; NW — ширина ядра; NS — размер ядра.

Таблица 4. Размер клеток в микрометрах (среднее±стандартное отклонение или доверительные интервалы) некоторых костных рыб

После красных кровяных телец преобладающим типом клеток являются тромбоциты. Они легко окрашиваются красителем Гимза; ядро становится темно-фиолетовым, а цитоплазма – светло розовой. Данные клетки более мелкие чем эритроциты. У костных рыб тромбоциты содержат лишь один тип гранул – лизосомы.

Окрашивание по Гимза позволяет идентифицировать все типы клеток крови: гранулоциты (нейтрофилы и эозинофилы), агранулоциты (моноциты и лимфоциты) и тромбоциты. Как правило лимфоциты преобладающий тип лейкоцитов в крови рыб (85% от всех белых клеток крови). В периферической крови петушков преобладали лимфоциты и нейтрофилы. Аналогичные результаты получены для видов Pimelodus maculates, Synbranchus marmoratus, Mugil platanus и Oncorhynchus mykiss. Лимфоциты являются одними наиболее важных клеток, ответственных за реализацию иммунных реакций. Они продуцируют антитела специфического иммунитета и предоставляют макрофаги. Повышение этих клеток обеспечивает защиту рыбок во враждебной среде. В настоящей работе у самок было больше лимфоцитов чем у самцов. Моноциты были крупнее лимфоцитов, имели круглую клетку и неровными краями. У рыб гранулоциты включали три типа клеток: наиболее распространенные нейтрофилы и эозинофилы и редкие базофилы. Эозинофилы и нейтрофилы относятся к гранулоцитам, встречающимся у большинства позвоночных. Нейтрофилы имели круглую клетку с нерегулярными краями. Эозинофилы – круглые клетки с многочисленными сферическими шипами, отходящими от мембраны.
——
Somayeh Pourali Motlagh, Asad Mohammadi Zarejabad, Rasol Ghorbani Nasrabadi, Ehsan Ahmadifar, Masoud Molaee. Haematology, morphology and blood cells characteristics of male and female Siamese fighting fish (Betta splendens). Comparative Clinical Pathology. 2012, Volume 21, Issue 1, pp 15-21.

https://scientificfinding.gau.ac.ir/uploading/scientificfinding.gau.ac.ir/images/ghorbani_rasool/poorali.pdf