Диагностика заболеваний у серебряного окуня

Серебряный окунь (Bidyanus bidyanus) принадлежит инфраклассу Teleostei, классу Костных рыб (Osteichthyes). Представители данной группы являются наиболее совершенными в эволюционном плане рыбами. Костистые рыбы подразделяются на две большие группы, мягкопёрых и колючепёрых. Последняя группа, включающая и серебряного окуня, наиболее продвинутая. Её члены обычно имеют костные шипы на некоторых плавниках, ктеноидную чешую и плавательный пузырь, который не сообщается с пищеводом. Большинство систем органов (сердце, печень, почки и т.д..) костистых рыб подобны системам органов млекопитающих с незначительными особенностями, отражающими водный образ жизни.

Внешнее строение
Внешнее строение

Сердечно-сосудистая система состоит из одного круга кровообращения. Сердце направляет кровь к жабрам, от которых она под слабым давлением распределяется по всему организму и затем возвращается обратно к сердцу. Серебряный окунь имеет также лимфатическую, нервную, половую и эндокринную системы. Расположение некоторых органов, например, поджелудочной железы, сложно определить. Она находится в мезентерическом жире, пилорическом отделе слепой кишки. Серебряный окунь является пойкилотермным или холоднокровным животным, температура тела которого полностью зависит от температуры окружающей среды. У него имеются непарные плавники (спинной, хвостовой и анальный) и парные (грудные и брюшные). Скелет состоит из черепа, позвоночного столба и скелета плавников. Череп построен из комплекса костных пластин (мозговой череп — neurocranium), обеспечивающий гибкость и окружающий органы обоняния, зрения и слуха. Нижняя часть черепа (branchocranium) представлена челюстями, жаберными крышками и жаберными дугами.

Скелет
Скелет

Внешнее строение
Жаберная крышка – костная пластина, которая обеспечивает защиту жабр и участвует в осуществлении дыхательных движений.
Боковая линия – орган чувств, состоящий и эпидермальных пор и реагирующий на изменение давления; проходит по обеим сторонам тела, от головы до основания хвостового плавника.
Плавники – костные/остистые и мягкие; участвуют в локомоциях и демонстрациях.
Эпидермис – клеточно-эпидермальный материал. Клетки покровов секретируют слизь, обладающую иммуноактивными свойствами. Участвуют в регуляции осмоса и плавании, защищают от жестких, режущих поверхностей. Главным образом, выступают в качестве защиты от неблагоприятных условий окружающей среды; содержат чувствительные клетки; выполняют экскреторную и в некоторой степени респираторную функции; кожа содержит множество пигментных клеток с меланином.

Кожа рыбы
Кожа рыбы

Чешуи – кальцифицированные, гибкие пластины с ростовыми кольцами; покрыты слоем клеток эпидермиса; участвуют в регуляции осмоса и механической защиты.
Жабры – основной респираторный орган; с большой площадью поверхности; захватывает кислород и выделяет азотсодержащие продукты и углекислый газ; поддерживает осмотическое давление и ионный баланс (абсорбция воды, выделение солей).

Внутреннее строение
Внутреннее строение

Внутреннее строение
Плавательный пузырь – тонкостенный мешок, наполненный газами; реагирует на изменение давления воды; участвует в регуляции плавучести и расположении тела в пространстве; участвует в создании звуков и их восприятии.
Почки – выделение воды для поддержания кровяного осмотического давления; обратное всасывание белков и ионов; удаление азотсодержащих продуктов из крови; Имеется передняя и задняя почки.
Сердце – двухкамерное (предсердие и желудочек); позади жабр в отдельной грудной полости; нагнетает кровь в сосуды через артерии до жабр, органов и телу.
Селезенка – плоский, лентовидный, темно-красный орган, расположенный около желудка в брюшном жире; фильтр в системе кровообращеня; продуцирует эритроциты.
Печень – крупная, бледная рыжевато-коричневая. Продуцирует пищеварительные ферменты; в печени накапливаются углеводы и жиры; продуцирует питательные вещества и токсины, впитывающиеся в кишечнике; в ней разрушаются кровяные тела и происходит выделение азота.
Желчный пузырь – темная, крапчато-зеленая; продуцирует желчь и участвует в переваривании липидов.
Желудок – прочный, мешковатый орган, оканчивающийся пищеводом. Участвует в пищеварении, секреции слизи, ферментов и кислоты.
Пилорический отдел слепой кишки – пальцеобразный карман. Участвует в пищеварении.
Кровь – гиперосмотическая ткань; участвует в реализации иммунного ответа и переносе питательных веществ, газов и продуктов метаболизма.
Кишечник – пищеварение; участвует в осморегуляции, регуляции липидного и белкового обмена.
Гонады – половые продукты; парные; свисают с дорсальной брюшной стенки; семенники белого/кремового цвета, плоские/угловатые; яичники розового/кремового цвета, округлые.
Опорно-двигательный аппарат – скелет состоит из костей, черепа, позвоночного столба, ребер, плечевого пояса, добавочных костей; красные и белые мышечные волокна используют аэробное дыхание и анаэробное для коротких толчков.

Ктеноидная чешуя
Ктеноидная чешуя

Дыхательная системаИнвентарь для диагностики
Для проведения диагностики на наличие заболеваний необходим следующий набор инструментов:
1. Бинокулярный микроскоп с мощным источником света, 10× окуляром и 4×, 10×, 20×, 40× объективами (общее увеличение, 40×, 100×, 200× и 400×).
2. Набор для проведения вскрытия, включающий остроконечные ножницы, скальпель и лезвия, предметные и покровные стекла, доску для разделывания и нож для умерщвления.
3. Сеть, невод, ведра, распылитель и компрессор.

Наблюдение
Пруд, садки и емкости должны проверяться ежедневно, в особенности те, которые:
1. Недавно (в течение 2 недель) заселялись или частично опустошались;
2. Водоемы с высокой плотностью (особенно, емкости с молодью);
3. При больших порциях добавляемого корма (>60 кг/га; летние температуры);
4. Плохое качество воды и её неожиданные вариации (водорослевый бум; низкая концентрация растворенного кислорода 30 °С; внезапное снижение температуры >4 °С в течение 24 часов; высокая концентрация аммония и уровень pH; тяжелая пена на поверхности водоема; цветение; недавние водные подмена);
5. Хищничество птиц;
6. Ценное маточное стадо.

Симптомы заболевания
Больные рыбы демонстрируют широкий спектр физической и поведенческой симптоматики, который сильно варьирует в зависимости от типа и тяжести заболевания, размера, возраста и состояния рыб, состояния хозяйства и сезона. Как правило, любые необычные симптомы у особей или неожиданные изменения состояния воды являются индикатором начала заболевания или нависшей угрозы. Некоторые из наиболее распространенных признаков включают:
1. Потерю аппетита – снижение пищевого поведения некоторыми или всеми рыбами;
2. Скопление рыб около поверхности, в углу, возле аэратора;
3. Нескоординированное передвижение рыб, скачкообразные движения;
4. Особи имеют необычную окраску; могут быть сероватыми или темными, с разрушенными участками кожи, выпуклыми глазами, покрасневшим головным мозгом или удлиненными и сменившими окраску органами;
5. Постепенная гибель рыб;
6. Присутствие или отсутствие корма в кишечнике.

Мониторинг качества воды
Первым действием при обнаружении признаков заболевания является проверка качества воды. Концентрация растворенного кислорода >3мг/л; pH 6-6,5; температура 10-30 °C.
Если отмечается выход показателей воды за допустимые рамки, необходимо прекратить кормление, увеличить аэрацию, начать водные подмены, внести известняк для повышения низкого pH (если <6,0).

Вылов рыб для проверки
После обнаружения следующих явлений необходимо выловить не менее 4-х рыб для осмотра: смертность и/или появление явно больных рыб; внезапное снижение аппетита (свыше 1-3 дней); ненормальное плавание (дергание, шатание), плавание у поверхности, изменение окраски; рыба не замечена в течение 2 недель или более, в частности, весной, летом или осенью (температура воды >15°C).

Исследование жабр и кожи
Для некроскопии в емкость аэрацией и прудовой водой отбираются живые, предпочтительно, умирающие особи. К микроскопии необходимо приступать сразу после умерщвления (отделяют спинной мозг непосредственно позади головы), потому что ряд паразитов стремятся отсоединиться и/или делаются неподвижными вскоре после гибели рыбы. Использование анестетика во время эвтаназии не рекомендуется, так как он может погубить или вызвать открепление эктопаразитов. Представленные далее процедуры применяются для диагностики эктопаразитов и некоторых грибковых и бактериальных инфекций.

Изучение жабр на крупной рыбе
Отодвигают жаберную крышку и с помощью ножниц отделяют белые, хрящевые жаберные дуги (два надреза), после чего удаляют более 10 мм жабр.
На предметное стекло помещают ткань. С помощью скальпеля отделяют хрящевую часть от первичной жаберной ламеллы.
Отодвигают жаберную дугу и наносят 2-3 капли дистиллированной воды на жаберную ламеллу (нельзя использовать хлорированную водопроводную или прудовую воду).
Накрывают препарат покровным стеклом и слегка надавливают.
Изучают препарат под маленьким (х40) и большим увеличением (х100).

Одиночная жаберная дуга (справа сверху), отделение жаберной ламеллы от жаберной дуги (снизу слева), здоровая жаберная тканьпод покровным стеклом (снизу справа)

Изучение жабр на мелкой рыбе ( Ножницами отрезают жаберную крышку, оголяя жабры.
Ножницами отрезают жаберную дугу и удаляют прикрепленные жабры.
Отделяют одну жабру и убирают остальные.
Помещают жабры (хрящевая жаберная дуга прикреплена) на предметное стекло и наносят 2-3 капли дистиллированной воды.
Накрываю препарат покровным стеклом, которое слегка приподнято из-за жаберной дуги.
Наносят капли воды под покровное стекло, пока ткань не окажется полностью под водой.
Исследуют препарат.

Исследование кожи
Помещают хвостовой плавник на предметное стекло.
Используя скальпель, слегка надавливая, проводят вдоль боковой поверхности, сдирая чешую.
Помещают кожу/слизь со скальпеля на предметное стекло.
Наносят 2-3 капли воды, накладывают покровное стекло и изучают под микроскопом.

Исследование плавников
Отрезают небольшой кусочек хвостового плавника или любого другого плавника, демонстрирующего очаги заболевания.
Помещают на предметное стекло.
Наносят 2-3 капли воды, накладывают покровное стекло и изучают под микроскопом.

Влажный нефиксированный препарат жаберной ткани (сверху вниз): крупный паразит жаберных сосальщик; органические частицы [om], паразиты Trichodina sp [t], Chilodonella hexasticha [c] (×100); жабры серебряного окуня, показаны первичные (p) и вторичные (s) ламеллы; патологические изменения в ткани жабр; чешуя (s), пузырьки воздуха (b) и паразиты (p).

Предоставление рыб для лабораторной диагностики
Когда заболевание нельзя диагностировать на рыбоводческой ферме, рыбу необходимо доставить в специальную лабораторию. Для данных целей наиболее подходящими кандидатами являются погибающие особи. Если транспортировка живой рыбы невозможна, в течение 3 часов в лабораторию необходимо привести образцы умерщвленной особи во льду. Если транспортировка длится дольше 3 часов, образцы предварительно помещаются в 10% раствор формалина. Ткань не должна быть толще 7 мм. Во всех случаях образец (орган или целая рыба) должна быть типичным представителем популяции и включать весь набор симптомом погибающей особи.

Транспортировка живой рыбы
Помещают 4-6 особей в прочную пластиковую, водо- и воздухонепроницаемую емкость с 1/3 прудовой водой и 2/3 чистого кислорода.
Желательно, лично перевозить образцы в ночное время.
Перед транспортировкой нельзя кормить рыбу.

Замороженные образцы
Заворачивают рыбу во влажную ткань или полотенце.
Помещают особь в пластиковую емкость и засыпают льдом.
Помещают в водонепроницаемый контейнер и перевозят в течение 3-х часов.

Подготовка образов мелкой рыбы (меньше 30 г)
Ножницами делают надрез от анального отверстия вдоль брюшка к жабрам (не трогают внутренние органы).
Помещают образы в пластиковую бутылку с 10% раствором нейтрального формалина.
Для ткани используют 10-ти кратный объем фиксатора.

Приготовление образцов крупной рыбы
Удаляют жир и вырезают внутренние органы (переднюю и заднюю почки, жабры, печень, сердце, кишечник. желудок, селезенку, головной мозг, кожу с боковой линией). Образцы кожи должны иметь 5 мм нормальной ткани вокруг поврежденного участка. Фиксация ткани производится как для мелкой рыбы.

Приготовленные образцы должны помещаться в три водонепроницаемых контейнера и маркироваться перед транспортировкой.

Замороженные образцы
Рекомендуется для токсикологического анализа и некоторых форм вирусологии.
Замороженная ткань редко используется в гистопатологическом анализе или микроскопии (два основных средства диагностики в рыбоводстве).
Замороженные образцы очень скоро подвергают отравлению.

Сопроводительная информация
Имя; адрес; телефон и дата
Вид рыбы; возраст и размер
Показатели воды, включая pH, температуру, концентрацию растворенного кислорода, аммоний, соленость.
Размер и тип хозяйства (пруд, канал, садок, бассейны).
Плотность посадки.
Начало гибели рыб и смертность в сутки.
Клинические симптомы (отсутствие аппетита, нарушение перемещений и т.д..).
Источник воды.
Рацион питания, размер порций и производитель; хранение.
Недавно проводимые мероприятия (за последние 2 недели): отлов, сортировка, водные подмены, внесение рыбы.
Изменения системы, то есть новые емкости, изменения рациона питания, химическая обработка.
Изменения окружающей среды, погодных условий.

Лабораторные процедуры
Образцы, принятые в лаборатории, обрабатываются и изучаются.
Гистопатология – фиксированная или свежая ткань декальцифицируется. Отдельные ткани разрезаются так, чтобы можно было рассматривать на толщину клетки. Их окрашивают и изучают под микроскопом.
Бактериология – бактериальная культура выращивается на специальной среде; целевые органы – почки. селезенка, мозг, жидкость брюшной полости; поврежденные участки кожи; используется только свежая ткань (для культивирования нельзя фиксировать ткань); проводится идентификация бактерий и проверка их чувствительности к антибиотикам.
Вирусология – культивирование вирусов на различных клетках рыбы; молекулярная диагностика, включая проведение ПЦР, секвенирования и иммуногологического анализа для идентификации вируса.

Гистологический срез жаберной ткани
Гистологический срез нормальной (сверху) и с гипеплазией (снизу) жаберной ткани

Обучение определения симптомов и диагностика заболевания
Первый шаг на пути определения заболевания включает ежедневные наблюдения за рыбой, водоемом, регулярный мониторинг качества воды и беглая оценка состояния кожи и биопсия жабр. Для новичков и неопытных фермеров интерпретация физических симптомов и результатов микроскопии затруднительны. Тем не менее, регулярное взятие образцов у здоровых и больных рыб облегчает распознавание здоровых и нездоровых тканей, помогает идентифицировать распространенные патогенные организмы и развить умения, необходимые для точной диагностики. Большинство вспышек заболеваний при разведении серебряного окуня вызвано распространенными патогенами, которые легко определить на ранних этапах развития болезни.

Чаще всего во время инфекции наблюдается изменение внешнего вида жабр и кожи. Однако определить возбудителя бывает сложно, что связано с проникновением вторичных агентов и возникновением системного заболевания. Ухудшение состояния жабр включает гиперемию, геморрагию, изъязвление, разрушение, изменение окраски или толщины эпителия. Нездоровая жаберная ткань часто имеет очаги гиперплазии и гипертрофии, вызванные ростом клеток и слипанием вторичных ламелл. Жабры и кожа могу иметь паразитов и бактерии, однако не проявлять клинических признаков заболевания. В данном случае интерпретация значимости возбудителей в патогенезе основывается на других клинических признаках.

В профилактике заболеваний одной из наиболее важных мер выступает поддержание хорошего качества воды. Однако этот показатель не всегда поддается контролю. Качество воды (концентрация растворенного кислорода, температура, pH и общий уровень азота) должны регулярно проверяться с использованием высокоточных приборов. Скрытые изменения качества воды, например, вспышка развития водорослей (вода приобретает цвет чайной заварки), высокие колебания температур (>5 °C в течение 24 часов), высокий уровень азотсодержащих соединений и низкая концентрация кислорода (<3 мг/л) могут вызвать стресс и заболевания. Наиболее распространены инфекции, вызываемые простейшими и грибками, поэтому мониторинг в прудах должен производиться ежедневно после ухудшения или изменения качества воды.
——

Здесь находится скрытый текст. Для его просмотра необходимо зарегистрироваться.

Реакция постоянных читателей:

Заметил ошибку, тык*:

 Orphus

Комментарии Вконтакте:

Добавить комментарий

Войти с помощью: 

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *